

随着氨基酸的广泛应用,对氨基酸的检测分析水平也在不断提高。由于HPLC技术无需特殊反应装置,高效、简便、快速、准确和价格低廉等优点,已广泛应用于多种生物样品内氨基酸的检测。
实验所用色谱柱常采用C18柱、C8柱以及CN柱,检测器使用紫外、荧光或电化学。少量氨基酸,如:酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、脯氨酸、组氨酸具有紫质,可用紫外检测器吸收外,其他氨基酸皆需在柱前或柱后衍生外吸收或荧光检测器进行测定。
流动相常采用强极性溶剂,如水、乙氰、甲醇以及磷酸盐缓冲液。不同种类、不同离子强度的缓冲液均可影响到氨基酸容量因子,此时缓冲液的pH值对容量因子的影响不大,但应注意当pH<2或pH>7对柱固定相有裂解作用。洗脱一般采用二级或三级梯度洗脱方式,洗脱程序明显影响分离效果。氨基酸与不同生化试剂反应后产生不同的衍生物,不同衍生物所需色谱条件也有差别。
HPLC已成为一种较为理想的检测氨基酸的方法。
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